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  • (供)蓝吉生物-病毒包装服务
  • 信息来源:dengyiwan 发布      发布于 2015-11-17
  • 类型: 科技项目转化- 技术外包
  • 合作方式:不限
  • 器械类别:不限
  • 浏览:1592次   评价:0次   收藏:0
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 广州蓝吉生物技术有限公司

公司为科研合作单位或个人提供实验场所、仪器设备、科研咨询、文献检索、样本检测、结果分析等全套科研服务,协助科研人员取得准确可靠的实验数据及相关论文论著发表,在科研合作的前期对每一个项目进行全方位的可行性评估,后期对该项目提供具体实验检测和技术支持等各方面的科研协作服务,并实现合作双方的学术共赢。

公司致力于科研服务和分子诊断类试剂研发,将为您提供全面快速的科研一体化服务。

 

病毒包装服务

1.逆转录病毒包装(技术服务-分子生物-病毒转染系统)

逆转录病毒 (Retrovirus) 是一类已知的RNA 病毒。需在逆转录酶的作用下首先将RNA 转变为cDNA,再在DNA 复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。该载体系统有两部分组成,一是带有外源基因的重组反转录病毒载体分子,二是能以反式提供病毒结构蛋白的包装细胞,其要求是能高效产生感染靶细胞的重组病毒颗粒,且无野生型的反转录病毒存在,后者是基因治疗安全性的关键问题。

服务流程:

1.含目的基因的逆转录病毒载体的构建和纯化提取;

2.逆转录病毒表达载体和辅助质粒共转染293T细胞;

3.大约在转染48 h后,收获逆转录病毒上清,轻轻地移出上清,用0.45μm的滤膜过滤,或在4℃以500g离心5min以除去活细胞;

4.如果在1~2 h内使用逆转录病毒上清,将其放置在冰上,若时间间隔较长时,置于干冰上冰冻,而后转到-70℃贮存; 

5.融化冰冻的上清,在37℃下加温片刻,立即使用。 

2慢病毒包装技术服务-分子生物-病毒转染系统)

慢病毒载体(Lentiviral vector)较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达siRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达siRNA/miRNA,实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默,为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能,以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。慢病毒作为siRNA/miRNA的携带者,不但具备特异性地使基因表达沉默的能力,而且充分发挥了慢病毒载体自身所具备的优势,为基因功能的研究提供了更强有力的工具。

服务流程:

1.含目的基因的慢病毒载体的构建和纯化提取;

2.慢病毒表达载体、pGag/PolpRevpVSV-G四质粒共转染293T细胞; 

3.培养48~72h,收集培养上清;

4.病毒的纯化和浓缩(超离和/或超滤);

5.滴度测定、目的基因检定;

6.将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达。

3.腺病毒包装(技术服务-分子生物-病毒转染系统)

腺病毒(Adenovirus)是目前最高效可靠的重组病毒表达系统之一,可用于在哺乳细胞和动物中瞬时及高水平地表达目的蛋白。

服务流程:

1.将外源基因构建至穿梭载体上;

2.将穿梭载体与腺病毒骨架载体进行LR体外重组;

3.将重组成功的腺病毒载体线性化,转染至HEK 293细胞中,包装腺病毒;

4.将获得的腺病毒感染HEK 293细胞,继续扩增,以获得更多的腺病毒;

5.收获腺病毒,提取其基因组DNA,进行PCR鉴定,以确定所得腺病毒的正确性。

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